Как да си направим фосфатно-буфериран физиологичен разтвор

Буфериран с фосфат физиологичен разтвор (PBS) е солена смес, използвана в биологичните изследвания. Използва се за разреждане на група клетки или за отделяне на клетки. Този буфер поддържа стабилно pH, така че клетките да не се унищожават, докато се гледат и съхраняват. Можете да направите 1X решение, което може да се използва директно върху клетки или можете да направите 10X запас, който може да бъде разреден до 1X. Ако вашата лаборатория използва много PBS, може би е добра идея да направите 10X запас, тъй като ще продължи по-дълго.

Изработка на 1X запас

Изработка на 1X запас
Съберете материалите и съставките си. За да направите 1X (нормалната концентрация, използвана за експерименти) разтвор на фосфатно-буфериран физиологичен разтвор (PBS), ще ви трябва 1-L градуиран цилиндър, баланс, 2-L чаша, бъркалка, бъркалка, pH метър, автоклав и стъклена бутилка за съхранение. За да направите 1 L PBS, ще ви трябва следните количества от всяка съставка: [1]
  • Малки количества разредена НС1 и / или NaOH до рН на крайния разтвор
  • 800 мл дестилирана вода
  • 8 g NaCl (натриев хлорид)
  • 0,2 g KCl (калиев хлорид)
  • 1,44 g Na2HPO4 (динатриев фосфат)
  • 0,24 g KH2PO4 (монокалиев фосфат)
  • Крайните концентрации на всяко съединение трябва да бъдат 137 mm NaCl, 10 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4, 2,7 mM KCl и pH 7,4. [2] X Изследователски източник
Изработка на 1X запас
Поставете бъркалката в чашата и поставете чашата върху плочата за разбъркване. Когато вземате някакво решение, искате да поддържате решението постоянно да се движи. Това ще помогне на всичко да се разтвори по-бързо. За да избегнете разплискване, след като добавите вода, поставете бъркалката в празната чаша и след това я поставете върху плочата за разбъркване. [3]
  • Барът за разбъркване съдържа магнит, който позволява на лентата да се върти и разбърква разтвора, когато върху разбъркващата плоча се постави контейнер с течност, който съдържа двигател. [4] X Изследователски източник
  • Изчакайте, докато в чашата има разтвор, преди да го включите.
Изработка на 1X запас
Отмерете 800 ml дестилирана вода в 2-L чаша, след което включете разбъркващата плоча. Когато приготвяте разтвор, започнете с по-малко от крайния обем вода. В края ще добавите останалата вода, за да доведете общия обем до 1 L. С помощта на градуирания цилиндър измерете 800 ml вода и го изсипете директно в чиста чаша. [5]
  • С водата в чашата включете бъркалката на средна скорост. Трябва да видите малка форма на водовъртеж във водата, когато бъркалката започва да се върти.
Изработка на 1X запас
Претеглете подходящите количества от всеки химикал. Претеглят се 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na НРО и 0,24 g KH PO , Използвайте везната, за да претегляте всеки химикал по едно в собствените си лодки за претегляне. [6]
  • Ако добавите прекалено много химикал, просто отстранете излишъка, докато получите нужното количество.
Изработка на 1X запас
Добавете всички химикали към разтвора и разтворете. Изсипете всеки химикал във водата, докато бърка. Няма специална поръчка за добавяне на всяка, така че можете да добавите всичко наведнъж. Оставете всичко да продължава да се разбърква, докато се разтвори напълно. [7]
  • Можете да оставите това да седи, докато правите нещо друго и да проверите по-късно. Ще отнеме поне 5-10 минути, за да се разтвори.
Изработка на 1X запас
Регулирайте рН на разтвора до 7,4. След като всичко се разтвори напълно, трябва да регулирате pH на буфера, докато стане 7,4. [8] Дръжте разбъркването и поставете pH метър в горната част на разтвора. Оставете числата на рН метъра да спрат да се движат. Разтворът вероятно ще бъде твърде кисел, така че ще трябва да добавите натриев хидроксид (NaOH), за да регулирате pH.
  • Използвайте малка пипета, за да добавите NaOH няколко капки наведнъж. След всяко добавяне, разтворът се разбърква за момент и проверявайте новото отчитане на pH-метър.
  • Регулирането на pH на разтвор е процес, който изисква търпение. Ако случайно отидете по-високо от 7,4, можете да добавите няколко капки солна киселина (HCl), за да я върнете обратно.
Изработка на 1X запас
Долива се водата, докато разтворът стане 1 литър. След правилното регулиране на рН можете да приведете разтвора си до крайния обем от 1 литър. Внимателно изсипете целия разтвор от чашата в 1-L градуиран цилиндър. Добавете достатъчно дестилирана вода, за да стане 1 л. [9]
  • Изсипете крайния разтвор в 1-L стъклена бутилка, безопасна за автоклавиране.
Изработка на 1X запас
Стерилизирайте разтвора в автоклав. Поставете капака върху бутилката, но не я завийте. По време на автоклавирането налягането в бутилката може да се натрупа и да избухне, ако стегнете капака. Поставете лента от автоклавна лента през капака, за да я задържите на място, докато автоклавирате. [10]
  • Задайте автоклава да се стерилизира в продължение на 20 минути при 15 psi на течния цикъл. [11] X Изследователски източник
  • Автоклавната лента има температурен индикатор в нея. Ако лентата с автоклав не почернее, когато процесът приключи, автоклавът не се нагрява достатъчно и ще трябва да стерилизирате отново.
Изработка на 1X запас
Съхранявайте PBS на стайна температура. След автоклавиране оставете PBS да се охлади до стайна температура и след това затегнете капака, за да не замърсителите. Затягането на капака преди бутилката да се охлади може да създаде вакуум и да затрудни много по-късно отстраняването на капака. PBS е стабилен при стайна температура. [12]
  • Можете също така да аликвотирате PBS в по-малки контейнери, за да използвате един по един.

Изработка на 10X запас

Изработка на 10X запас
Съберете материалите и съставките си. Ако направите запасите от 10X (десет пъти повече от използваната нормална концентрация) е почти идентичен с това да направите 1X запас, просто добавяте 10 пъти повече от количеството химикали. За да направите 10X склад, ще ви е необходим 1-L градуиран цилиндър, везна, 2-L чаша, бъркалка, разбъркваща плоча, pH-метър, автоклав и стъклена бутилка за съхранение. [13] За да направите 1-L ще са ви необходими следните количества от всяко съединение: [14]
  • 700 мл дестилирана вода
  • 80 g NaCl (натриев хлорид)
  • 2 g KCl (калиев хлорид)
  • 14,4 g Na2HPO4 (динатриев фосфат)
  • 2.4 g KH2PO4 (монокалиев фосфат)
  • Също така ще се нуждаете от малки количества HCl и / или NaOH, за да рН на крайния разтвор.
  • Крайните концентрации на всяко съединение в 10X разтвора са 1,37 М NaCl, 27 mM KCl, 100 mM Na2HPO4 и 18 mM KH2PO4.
Изработка на 10X запас
Поставете стъклената чаша върху плочата за разбъркване и добавете бъркалката. За да разтворите всичко бързо, използвайте бъркалка и разбъркваща планка, за да поддържате разтвора постоянно да се движи. Поставете бъркалката в празната чаша, преди да започнете, за да избегнете пръски. [15]
  • Изчакайте, докато в чашата има разтвор, преди да включите разбъркващата плоча.
Изработка на 10X запас
Отмерете 700 ml дестилирана вода в 2-L чаша, след което включете разбъркващата плоча. Искате да започнете с по-малко от крайния обем, защото силата на звука ще се промени, когато добавите съединенията към него. След като всичко е добавено и разтворено, ще добавите останалата вода, за да приведете общия обем до 1-L. Измерете 700 мл вода с градуирания цилиндър и го изсипете директно в чиста чаша. [16]
  • След като се добави вода, включете бъркалката на средна скорост. Трябва да видите малка форма на водовъртеж във водата, когато бъркалката започва да се върти.
Изработка на 10X запас
Претеглете подходящите количества от всеки химикал. Претеглят се 80 g NaCl, 2 g KCl, 14,4 g Na НРО и 2,4 g KH PO , Претегляйте всеки химикал поотделно в собствената си лодка за тегло. [17]
  • Ако добавите прекалено много химикал, просто отстранете излишъка, докато получите нужното количество.
Изработка на 10X запас
Разтворете всички химикали в разтвора. Добавете всеки химикал към водата, докато се разбърква. Няма специална поръчка за добавяне на всяка, така че можете да добавите всичко наведнъж. Продължавайте да разбърквате, докато целият прах се разтвори напълно. [18]
  • Ще отнеме поне 5-10 минути, за да се разтвори, затова го оставете да се разбърква и проверете по-късно.
Изработка на 10X запас
Уверете се, че pH на разтвора е 7,4. Когато всичко е напълно разтворено, трябва да проверите pH на буфера и да го настроите на 7.4. [19] Дръжте разбърканата лента и потопете върха на pH метъра в горната част на разтвора. Оставете числата на рН метъра да спрат да се движат, за да измерят текущото pH. Разтворът вероятно ще бъде твърде кисел, така че ще трябва да добавите натриев хидроксид (NaOH), за да го направите по-основен.
  • Използвайте малка пипета, за да добавите NaOH няколко капки наведнъж. След всяко добавяне, разтворът се разбърква за момент и изчакайте, докато числата престанат да се движат. Продължавайте да добавяте NaOH, докато достигнете 7.4.
  • За да се pH на разтвор е процес, който изисква търпение. Ако случайно отидете по-високо от 7,4, можете да добавите няколко капки солна киселина (HCl), за да я върнете обратно.
Изработка на 10X запас
Добавете вода, за да направите крайния обем 1 литър. При правилно регулиране на pH довеждайте разтвора до крайния обем от 1 литър. Внимателно изсипете целия разтвор от чашата в 1-L градуиран цилиндър. Добавете достатъчно дестилирана вода, за да стане 1 л. [20]
  • Изсипете крайния разтвор в 1-L стъклена бутилка, безопасна за автоклавиране.
Изработка на 10X запас
Използвайте автоклава за стерилизиране на разтвора. Поставете капака върху бутилката, но не го завийте докрай. Процесът на автоклав произвежда пара, която може да доведе до натрупване на налягане в бутилката. Ако капакът се затегне, бутилката може да избухне. Използвайте лента от автоклавна лента през капака, за да я държите на място, докато автоклавирате. [21]
  • Задайте автоклава да се стерилизира в продължение на 20 минути при 15 psi в течен цикъл. [22] X Изследователски източник
  • Автоклавната лента има температурен индикатор в нея. Ако достигне правилната температура, лентата ще стане черна. Ако лентата не почернее, автоклавът не се загрее достатъчно и ще трябва да стерилизирате отново.
Изработка на 10X запас
Съхранявайте PBS на стайна температура. След автоклавиране оставете PBS да се охлади напълно, преди да стегнете капака. Ако затегнете капака, докато той все още е горещ, той може да създаде вакуум, което ще затрудни много по-късно свалянето на капака. PBS е стабилен дългосрочно при стайна температура. [23]
  • Можете също така да аликвотирате PBS в по-малки контейнери, за да използвате един по един.

Разреждане на 10X запаса до 1X

Разреждане на 10X запаса до 1X
Определете количеството 1X разтвор, което ще ви трябва. Първо, трябва да знаете колко 1X запаси искате, преди да можете да изчислите колко 10X запаси ще ви трябват. Сумата, която ще направите, ще зависи от вида на експеримента, който правите.
  • Ако имате нужда само от аликвота от 1X склад, за да имате около, направете около 500 мл. Можете да използвате този 1X запас за известно време и няма да се налага да го правите толкова често.
Разреждане на 10X запаса до 1X
Изчислете необходимото количество 10X запас. За да изчислите необходимото количество 10X запаси, просто разделите общия си обем на 10. [24] Не забравяйте, че за да получите правилния обем, вашите единици трябва да съвпадат: ако обемът, който правите, е в милилитри, добавеният обем ще бъде в милилитри.
  • Например: Ако искате 500 ml разтвор, разделете 500 на 10 и ще получите 50 ml. Имате нужда от 50 mL 10X запас, за да направите 500 mL от 1X.
  • Например: Ако искате 2 L разтвор, разделете 2/10 и получавате 0,2 L. Можете да конвертирате това в mL, като умножите по 1000. Имате нужда от 200 mL от 10X запас, за да направите 2 L от 1X.
Разреждане на 10X запаса до 1X
Извадете 10X обема от общия обем. За да определите количеството вода, необходимо за разреждане на 10X запаса, просто трябва да извадите изчисления 10X обем от общия обем, който искате. [25]
  • Например: За да направите 500 ml, се нуждаете от 50 ml от 10X запас. Тъй като 500 - 50 = 450, имате нужда от 450 мл дестилирана вода за разреждане на запаса.
Разреждане на 10X запаса до 1X
Разредете 10X запаса с дестилирана вода. Използвайки количествата, които сте изчислили, добавете дестилирана вода към 10X запасите. Вече сте направили 1X запас от PBS. [26]
  • Например, добавете 50 ml 10X запас към 450 ml дестилирана вода, за да направите 1X PBS запас. Завъртете контейнера, за да смесите разтвора.
Разреждане на 10X запаса до 1X
Проверете pH на 1X запаса. Понякога процесът на разреждане влияе върху рН на буфера. Препоръчително е да проверите рН на 1X запасите и да се уверите, че е 7,4 след разреждане. [27]
  • Използвайте pH метър за измерване на рН и използвайте HCl или NaOH, за да коригирате буфера до рН 7,4.
Химикалите, използвани за производството на PBS, са безопасни за работа, но е важно да се носят подходящи защитни средства по всяко време, когато работите в лабораторията.
Носете ръкавици, лабораторно палто и защита на очите, докато сте в лабораторията.
Винаги следвайте това протоколи за безопасност когато работите в лаборатория.
Въпреки че не ви трябват да правят PBS, винаги знайте къде са вашите аварийни душове и очила.
punctul.com © 2020